Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来肝细胞自身抗本体到显现出来1型式乳癌药理学病因的实质性百余人在成年人一时期就有不太好的描述，多个肝细胞自身抗本体阴性的成年人之中曾70%在血清转换后10年内中风乳癌，而随访15年的成年人这一百分比减少到84%。相对来说之下，分之二药理学1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的肺癌机制还不会获取应有的深入研究。

越来越多的人开始运用于分阶段系统来定义1型式乳癌的实质性：个本体在显现出来多种肝细胞自身抗本体时转到第1阶段，显现出来血糖出现异常时转到第2阶段，显现出来病因时转到第3阶段。一些多发肝细胞自身抗本体阴性的个本体，在1期和2期，实质性速度极快，并持续发展为肺癌的1型式乳癌。我们之前描述了一第一组在首次检验到多种肝细胞自身抗本体比对后据估计10年无乳癌的正因如此极快实质性者，这第一组病因人数少，但相似性非常明确。随后，我们辨认出肝细胞自身抗本体特异性CD8+T中央线粒本体质子化在实质性比速度极快的病因之中基本不存在，但在更进一步肺癌和一直存在的乳癌病因之中很容易检验到。这也许说明，与实质性病因相对来说，这些病因自身免疫质子化的调节大幅提高。

早期深入研究说明，尽管调节性T中央线粒本体(Treg)数量但会，但乳癌病因存在一些功用原因，其之中之外对IL-2的质子化灵已逝性增大。此外，乳癌病因之中的震荡CD4+T中央线粒本体也许对调节越来越具抵抗性，体现为震荡T中央线粒本体的抑止消退，人为造成了的Treg和本灌注造成了的抑止Treg，以及抗本体境况的CD4+T中央线粒本体之中IL-2质子化消退。本深入研究的目的是描述了CD4+调节性T中央线粒本体(Treg)在一个大正因如此比速度极快实质性者之中的相似性，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的之中轴深入研究，在21岁以下确诊的病因亲属之中健康检查1型式乳癌的危险因素。我们之前描述了一直比速度极快实质性者的相似性，他们保持多重肝细胞自身抗本体阴性超过10年，但不会显现出来乳癌的药理学病因，极快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名独自保持无乳癌并情愿包括大量本体液比对的比速度极快实质性者纳入T和B中央线粒本体功用量化。在迄今为止的深入研究之中，8名极快实质性者(SP第一组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肝细胞自身抗本体阴性。所有的参加者都西北面1型式乳癌实质性的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗本体对某些抗本体的阴性质子化，然而，一名病因已经西北面2期据估计6年，但不会显现出来药理学病因，一名病因被诊断为乳癌，该受测者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之中对该ADP顺利完成了原则上审计。分离出来外周血单个连锁反应中央线粒本体(PBMCs)，运用于多参数流式中央线粒本体妖术和T中央线粒本体抑止试验审计ADP之中Treg的频百余人、特异性和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和复出)顺利完成无统筹聚类量化，审计Treg特异性。

结果：与健康ADP相对来说，来自极快实质性本体的遗忘CD4+T中央线粒本体的统筹聚类辨识，激已逝的遗忘CD4+ Treg频百余人减少，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来减少有关。一名HbA1c上升的病因与实质性比速度极快者和给定的相比较第一组相对来说，Treg明人有所相同。功用新辨认出，与健康ADP相对来说，来自比速度极快实质性本体的Treg介导的CD4+震荡T中央线粒本体抑止显着损害。体现为对震荡CD4+T中央线粒本体CD25和CD134表达出来的抑止减少。

左图1 系统地的特异性量化辨识，CD4+Treg亚型式在极快实质性链表之中减少。由FlowSOM转换成的Treg室，有数在来自所有ADP的已逝CD4+CD45RA -中央线粒本体上。根据标识物表达出来解剖出10个元簇:遗忘T中央线粒本体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T中央线粒本体;HLA-DR + GITR +遗忘T中央线粒本体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个相同Treg标识转换成的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个一个大(100个一个大)，越来越大的元一个大(10个元一个大)在键值第一组周围绘图。每个键值之中的饼左图坚称单个标识的表达出来级别。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整本体标识表达出来。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)转换成左图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster装入中央线左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T中央线粒本体(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T中央线粒本体(l)。紫色白点值得一提的是理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的相吻合式证实，Treg频百余人的减少是实质性比速度极快的徽章。分级除此以外(a - f)和棉花量化(g-k)比较SP参加者和给定的HD参加者在CD4+CD45RA−T中央线粒本体上的区别。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的值得一提的是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利完成分离出来，实时FlowSOM群本体。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)第一组以及ADPSP 606(紫色)之中CD25+ cd127的频百余人综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外叔父集的装入中央线左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度填充，上标醒目的簇被辨识为SP和HD链表错综复杂的相同。(j)装入中央线左图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(百分比)。(k)直方左图辨识每个簇的特异性(暗红色)和Treg标识相对来说表达出来与故事情节表达出来(红色);上列，存储器Treg_3;下面动身，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇之中标识的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与健康献血者相对来说，实质性比速度极快者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T中央线粒本体元簇(遗忘T中央线粒本体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T中央线粒本体;HLA-DR + GITR +遗忘T中央线粒本体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达出来标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达出来热左图(sp606不之外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表达出来结合，辨识直方左图(c)和综合左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有ADP之外，p< 0.05(红色)ADPSP 606和给定的HD不之外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表达出来，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)结合，辨识直方左图(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自比速度极快实质性的CD4+ treg中央线粒本体控制震荡CD4+T中央线粒本体的灵已逝性增大。SP第一组用红色的中央线和白点坚称，HD第一组用黑色的中央线和白点坚称，紫色的中央线/白点坚称ADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒本体顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按判读的百分比高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠已逝化中央线粒本体，培植3同一天顺利完成流式中央线粒本体妖术检验。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应的treg培植(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。运用于阴性相比较(激已逝的响应中央线粒本体不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 震荡CD4+T中央线粒本体对比速度极快实质性的T中央线粒本体已逝化的抑止越来越引人注目。SP第一组用红色的中央线和白点坚称，HD第一组用黑色的中央线和白点坚称，紫色的中央线/白点坚称ADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒本体顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按判读的百分比高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠已逝化中央线粒本体，培植3同一天顺利完成流式中央线粒本体妖术(CD25反染)和中央线粒本体因叔父量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培植。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE抑止百分百余人(b)。(c,d) CD25抑止百分百余人(c)和CD134抑止百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比速度极快实质性叔父的已逝化遗忘CD4+Treg在GITR表达出来之中获取了适配和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1型式乳癌风险个本体之中的系统性的必要性。

原文中曾：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28