Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里面逐渐扩展

从第一次注意到胰脏自身血清到注意到1型式肾病病患病征的方面部将在成人时代就有很好的详细描述，多个胰脏自身血清白血病的成人中所有70%在血清转换后10年内患肾病，而随访15年的成人这一比重增高到84%。相较之下，占病患1型式肾病一半以上的型式1型式肾病的发病机制还无法得不到适当的研究工作。

越来越多的人开始用作分期种系统来定义1型式肾病的方面：个棒状在注意到多种胰脏自身血清时进入第1期中，注意到血糖持续性时进入第2期中，注意到病征时进入第3期中。一些多发胰脏自身血清白血病的个棒状，在1期和2期，方面较较慢，并发展为发病的1型式肾病。我们先前详细描述了一两组在首次检测到多种胰脏自身血清抽取后至来得少10年无肾病的极较慢方面者，这两组病患人数来得少，但特征相当明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞核加成在方面加速的病患中所大体上不存在，但在现阶段发病和一直存在的肾病病患中所很容易检测到。这可能暗示，与方面病患相较，这些病患性疾病加成的调节增强。

早期研究工作暗示，尽管调节性T细胞核(Treg)使用量长时间，但肾病病患存在一些特性缺陷，其中所包括对IL-2的加成能够减少。此外，肾病病患中所的震荡CD4+T细胞核可能对调节来得具抵抗性，观感为震荡T细胞核的可抑制减弱，大自然导致的Treg和棒状外导致的抑制Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞核中所IL-2加成减弱。本研究工作的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在领头极加速方面者中所的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁所列确诊的病患亲属中所健康检查1型式肾病的危险因素。我们先前详细描述了一直加速方面者的特征，他们保持多重胰脏自身血清白血病有约10年，但无法注意到肾病的病患病征，较慢性或非顺利受累性疾病。随后，10名继续保持无肾病并愿意提供大量血清抽取的加速方面者归属于T和B细胞核特性深入研究工作。在目前的研究工作中所，8名较慢方面者(SP两组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身血清白血病。所有的与会者都始终保持1型式肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身血清对某些抗体的白血病加成，然而，一名病患早已始终保持2期至来得少6年，但无法注意到病患病征，一名病患被病患为肾病，该受试者72岁，在采集物理抽取时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究工作中所对该供棒状顺利进行了单独审核。复合外周血单个核细胞核(PBMCs)，改用多数值流式细胞核妖术和T细胞核可抑制试验审核供棒状中所Treg的频部将、变异式和特性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究工作、并不一定和紧接)顺利进行无统筹聚类深入研究工作，审核Treg变异式。

结果：与肥胖症供棒状相较，来自较慢方面棒状的梦境CD4+T细胞核的统筹聚类说明了，激活的梦境CD4+ Treg频部将增高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关亚基(GITR)传达增高有关。一名HbA1c上升的病患与方面加速者和归一化的折衷两组相较，Treg著者有所相同。特性深入研究工作暗示，与肥胖症供棒状相较，来自加速方面棒状的Treg介导的CD4+震荡T细胞核可抑制相较受损。观感为对震荡CD4+T细胞核CD25和CD134传达的可抑制增高。

所示1 深入的变异式深入研究工作说明了，CD4+Treg亚型式在较慢方面函数调用中所增高。由FlowSOM作用于的Treg室，涌进在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物传达深入研究工作出10个元簇:梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个相同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个节点亦然一个战略性(100个战略性)，来得大的元战略性(10个元战略性)在节点两组周围上色。每个节点中所的饼所示说明单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整棒状标明传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster箱终点站所示(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞核(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞核(l)。红色格子亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模型式证实，Treg频部将的增高是方面加速的标识。PG旁路(a - f)和柑橘深入研究工作(g-k)来得SP与会者和归一化的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的特色所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行复合，模拟器FlowSOM群棒状。(b) HD(环纹)和SP(蓝点)两组以及供棒状SP 606(红色)中所CD25+ cd127的频部将汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路有界的箱终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心可视，交叉突出的簇被识别为SP和HD函数调用二者之间的相同。(j)箱终点站所示说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(比重)。(k)直方所示说明了每个簇的变异式(粉红色)和Treg标明相对来说传达与背景传达(紫色);上列，缓存Treg_3;示意图几同一天，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中所标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与肥胖症献血者相较，方面加速者梦境treg的GITR增高。每个梦境CD4+T细胞核元簇(梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有供棒状包括，p< 0.05(紫色)供棒状SP 606和归一化的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从PG旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)串联，说明了直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自加速方面的CD4+ treg细胞核支配震荡CD4+T细胞核的能够减少。SP两组用紫色的终点站和格子说明，HD两组用粉红色的终点站和格子说明，红色的终点站/格子说明供棒状sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按检视的比重试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培养3同一天顺利进行流式细胞核妖术检测。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培养(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。用作白血病折衷(激活的鼓动细胞核不含treg)计算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

所示5 震荡CD4+T细胞核对加速方面的T细胞核酪氨酸的可抑制来得敏感。SP两组用紫色的终点站和格子说明，HD两组用粉红色的终点站和格子说明，红色的终点站/格子说明供棒状sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按检视的比重试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培养3同一天顺利进行流式细胞核妖术(CD25反染)和细胞核因子深入研究工作。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协力培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制前年(b)。(c,d) CD25可抑制前年(c)和CD134可抑制前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

得出结论结论：我们得出结论的得出结论结论是，来自加速方面子的酪氨酸梦境CD4+Treg在GITR传达中所得不到了扩展到和丰富，特别强调了进一步研究工作Treg在1型式肾病风险个棒状中所的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28